HJ 755-2015 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法

发布时间：2021-12-27 11:39:44 丨 浏览次数：

6 样品

6.1 样品采集

    与其他项目一同采样时，先单独采集微生物样品，采样瓶不得用水样洗涤，按无菌操作的要求采集水 样约 200 ml 于灭菌的采样瓶中。

    采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面 10～15  cm 处，瓶口朝水流方向，拔玻塞，使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可 握住瓶子水平前推。采好水样后，迅速扎上无菌包装纸。

    从龙头装置采集样品时，不要选用漏水的龙头，采水前将龙头打开至最大，放水 3～5  min；然后将龙头关闭，用火焰灼烧约 3 min 灭菌，开足龙头，再放水 1 min，以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。

    采集地表水、废水样品及一定深度的水样时，可使用灭菌过的专用采样装置采样。 在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。

6.2 样品保存

    采样后 2 h 内检测，否则，需 10 ℃以下冷藏并不得超过 6 h。实验室接样后，不能立即开展检测的，应将样品放入 0～4 ℃冰箱并 2 h 内测定。

6.3 干扰和消除

    如果采集的是含有余氯或经过加氯处理的水样，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（4.3）0.2 ml； 如果采集的是重金属离子含量较高的水样，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（4.4）0.6 ml，以消除干扰。加入干扰消除剂的采样瓶 121 ℃高压蒸汽灭菌 20 min，采样瓶外壁及包扎纸干燥后可用于样品采集。酸性样品，需在分析前按无菌操作要求调节样品的 pH 值至 7.0～8.0。

    注 2：10 mg 硫代硫酸钠可保证去除水样中 1.5 mg 余氯，硫代硫酸钠用量可根据水样实际余氯量调整。

7 分析步骤

    以下步骤均在无菌操作的条件下进行。

7.1 接种水样的准备

    当每张纸片接种水样量为 10 ml 或 1 ml 时，充分混匀水样备用即可。

    当每张纸片接种水样量小于 1 ml 时，水样应制成稀释样品后使用。接种量为 0.1 ml、0.01 ml 时，分别制成 1:10 稀释样品、1:100 稀释样品。其他接种量的稀释样品依次类推。

    1:10 稀释样品的制作方法为：吸取 1 ml 水样，注入盛有 9 ml 无菌水的试管中，混匀，制成 1:10 稀释样品。其他稀释度的稀释样品同法制作。

7.2 水样接种

7.2.1 接种量

    每个样品按三个 10 倍递减的不同接种量接种，每个接种量分别接种 5 张纸片，共接种 15 张纸片。根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使 5 个接种量最大的纸片为阳性、5 个接种量最小的纸片为阴性，避免出现所有三个不同接种量共 15 张纸片全部为阳性或者全部为阴性。

    清洁水样的参考接种量分别为 10 ml、1 ml、0.1 ml，受污染水样参考接种量根据污染程度可接种 1 ml、0.1 ml、0.01 ml 或 0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml 等，见下表 1。

7.2.2 接种

    清洁水样，接种水样总量为 55.5 ml，10 ml 水样量纸片 5 张，每张接种水样 10 ml，1 ml 水样量纸片 10张，其中 5 张各接种水样 1 ml，另 5 张各接种 1:10 的稀释水样 1 ml。受污染水样，接种 3 个不同稀释度的1 ml 稀释水样各 5 张。

    接种水样应均匀滴加在纸片上，纸片充分浸润、吸收水样，用手在聚丙烯塑膜袋外侧轻轻抚平，做好 标记。

    注 3：纸片加入水样后，短时间内变黄或褪色，表明水样存在酸性物质或氧化剂干扰，需按“6.3 干扰和消除”去除。

7.3 培养

    检测总大肠菌群时，在 37±1 ℃的条件下培养 18～24 h 后观察结果；检测粪大肠菌群时，在 44.5±0.5 ℃ 的条件下培养 18～24 h 后观察结果。

    注 4：检测粪大肠菌群时，纸片接种后应立即放置于 44.5±0.5 ℃的恒温培养箱中培养，在常温下放置过久将影响检测结果的准确性。

7.4 对照试验

7.4.1 空白对照

    用无菌水做全程序空白测定，培养后的纸片上不得有任何颜色反应，否则，该次样品测定结果无效， 应查明原因后重新测定。

7.4.2 阳性及阴性对照

    总大肠菌群测定的阳性菌株为大肠埃希氏菌（ Escherichia  coli） ， 阴性菌株为金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）；粪大肠菌群测定的阳性菌株为大肠埃希氏菌（Escherichia  coli），阴性菌株为产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）。

    上述标准菌株均制成浓度为 300～3000  个/ml 的菌悬液，分别取相应水量的菌悬液接种纸片，阳性与阴性菌株各 5 张，按“7.3 培养”要求培养，大肠埃希氏菌应呈现阳性反应；金黄色葡萄球菌、产气肠杆菌应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

    注 5：可先制备较高浓度菌悬液，采用血球计数器在显微镜下对其浓度进行初步测定，然后根据实际情况用无菌水稀释至 300～3000  个/ml。

7.5 结果判读

    （1）纸片上出现红斑或红晕且周围变黄，为阳性。

    （2）纸片全片变黄，无红斑或红晕，为阳性。

    （3）纸片部分变黄，无红斑或红晕，为阴性。

    （4）纸片的紫色背景上出现红斑或红晕，而周围不变黄，为阴性。

    （5）纸片无变化，为阴性。 结果判读参照图片见附录 A。

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