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HJ 897-2017 水质 叶绿素a 的测定 分光光度法

发布时间:2021-11-27 16:34:10 丨 浏览次数:

6 样品

6.1 样品采集

    按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 中的相关规定进行样品的采集。样品的采集一般使用有机玻璃采水器或其他适当的采样器采集水面下 0.5 m 样品,湖泊、水库根据需要可进行分层采样或混合采样,采样体积为 1 L 或 500 ml。如果样品中含沉降性固体(如泥沙等),

    应将样品摇匀后倒入 2 L 量筒,避光静置 30 min,取水面下 5 cm 样品,转移至采样瓶(5.1)。在每升样品中加入 1 ml 碳酸镁悬浊液(4.4),以防止酸化引起色素溶解。

    注:如果水深不足 0.5 m,在水深 1/2 处采集样品,但不得混入水面漂浮物。

6.2 样品保存

    样品采集后应在 0 ℃~4 ℃避光保存、运输,24 h 内运送至检测实验室过滤(若样品24 h 内不能送达检测实验室,应现场过滤,滤膜避光冷冻运输),样品滤膜于-20  ℃避光保存,14 d 内分析完毕。

    注:样品采集后,如条件允许,宜尽快分析完毕。

6.3 试样的制备

6.3.1 过滤

    在过滤装置(5.2)上装好玻璃纤维滤膜(4.5)。根据水体的营养状态确定取样体积,见表 1,用量筒量取一定体积的混匀样品,进行过滤,最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。过滤时负压不超过 50 kPa,在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤,用镊子将滤膜取出,将有样品的一面对折,用滤纸吸干滤膜水分。

    注:仅当富营养化水体的样品无法通过玻璃纤维滤膜时,可采用离心法浓缩样品,但转移过程中应保证提取效率,避免叶绿素a 的损失及水分对丙酮溶液浓度的影响。

表 1 参考过滤样品体积

营养状态

富营养

中营养

贫营养

过滤体积(ml)

100~200

500~1000

6.3.2 研磨

    将样品滤膜放置于研磨装置(5.3)中,加入 3 ml~4 ml 丙酮溶液(4.3),研磨至糊状。补加 3 ml~4 ml 丙酮溶液(4.3),继续研磨,并重复 1~2 次,保证充分研磨 5 min 以上。将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管(5.5)中,用丙酮溶液(4.3)冲洗研钵及研磨杵,一并转入离心管中,定容至 10 ml。

    注:叶绿素对光及酸性物质敏感,实验室光线应尽量微弱,能进行分析操作即可,所有器皿不能用酸浸泡或洗涤。

6.3.3 浸泡提取

    将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后,用铝箔包好,放置于 4  ℃避光浸泡提取 2 h以上,不超过 24 h。在浸泡过程中要颠倒摇匀 2~3 次。

6.3.4 离心

    将离心管放入离心机(5.4),以相对离心力 1000 ×g(转速 3000 r/min~4000 r/min)离心 10 min。然后用针式滤器(5.7)过滤上清液得到叶绿素 a 的丙酮提取液(试样)待测。

6.4 空白试样的制备

    用实验用水按照与试样的制备(6.3)相同的步骤进行实验室空白试样的制备。

7 分析步骤

7.1 试样测定

    将试样移至比色皿中,以丙酮溶液(4.3)为参比溶液,于波长 750 nm、664 nm、647 nm、630 nm 处测量吸光度。

    750 nm 波长处的吸光度应小于 0.005,否则需重新用针式滤器(5.7)过滤后测定。

7.2 空白试验

    按照与试样测定(7.1)相同的步骤进行实验室空白试样(6.4)的测定。

8 结果计算与表示

8.1 结果计算

    试样中叶绿素 a 的质量浓度(mg/L),按照公式(1)进行计算:

ρ1  = 11.85 ×  ( A664 - A750 ) - 1.54 × ( A647  -  A750 ) - 0.08 × ( A630 - A750 )       (1)

    式中:

    ρ1——试样中叶绿素 a 的质量浓度,mg/L;

    A664——试样在 664 nm 波长下的吸光度值;

    A647——试样在 647 nm 波长下的吸光度值;

    A630——试样在 630 nm 波长下的吸光度值;

    A750——试样在 750 nm 波长下的吸光度值。

    样品中叶绿素 a 的质量浓度(μg/L),按照公式(2)进行计算:

HJ 897-2017 水质 叶绿素a 的测定 分光光度法(图1)     

    式中:

    ρ——样品中叶绿素 a 的质量浓度,μg/L;

    ρ1——试样中叶绿素 a 的质量浓度,mg/L;

    V1——试样的定容体积,ml;

    V——取样体积,L。

8.2 结果表示

    当测定结果小于 100 μg/L 时,保留至整数位;当测定结果大于等于 100 μg/L 时,保留三位有效数字。

9 精密度和准确度

9.1 精密度

    六家实验室对叶绿素 a 浓度为 5 μg/L、11 μg/L、25 μg/L 的统一地表水样品进行了 6 次重复测定,实验室内相对标准偏差分别为:5.6%~11%,3.1%~6.0%,1.8%~5.0%;实验 室间相对标准偏差分别为:5.2%,8.9%,5.9%;重复性限为:2 μg/L,2 μg/L,3 μg/L。再现性限为:2 μg/L,4 μg/L,5 μg/L。

9.2 准确度

    六家实验室对含叶绿素 a 浓度为 11 μg/L、25 μg/L 的统一地表水样品进行叶绿素 a 纯品溶液加标测定,加标量为9 μg/L、28 μg/L,加标回收率范围为83.6%~95.9%和79.9%~92.0%,加标回收率最终值为 89.2%±10.8%;86.3%±8.8%。

10 质量保证和质量控制

10.1 空白试验

    每批样品应至少做一个实验室空白试验,其测定结果应低于方法检出限。

10.2 平行样测定

    每批样品应至少测定 10%的平行双样。样品数量少于 10 个时,应至少测定一个平行双样,测定结果的相对偏差应≤20%。

11 废物处理

    实验室过程中产生的废液,应集中收集,并做好相应标识,委托有资质的单位处理。

 

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