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HJ 775-2015 水质 蛔虫卵的测定 沉淀集卵法

发布时间:2021-10-28 16:57:46 丨 浏览次数:

6 样品

    按 HJ/T 91 中对一般污染物采样的要求,用 10 L 以上容积的塑料桶采样。采样前需用样品荡洗塑料桶,采集样品量应≥10 L,常温下运回实验室,立即进行过滤(7.1)和沉淀(7.2)。

7 分析步骤

7.1 过滤

    充分摇匀样品,转入不锈钢开口直壁容器(5.6)至 10 L 刻度。如样品中含有草梗、纸渣等较大杂质,需将样品用筛网(5.5)过滤,并用吐温 80 溶液(4.3)清洗筛网(5.5)及杂质, 洗液并入过滤后的 10 L 样品中。

7.2 沉淀

    上述样品(7.1)在 15 ℃~25 ℃室温下静置过夜沉淀 12 h~24 h,用虹吸管(5.8)小心吸取并弃去上清液,避免扰动,保留 1 L 含沉淀物的样品,转入 1000 ml 开口直壁量筒(5.7), 分别用 50 ml 吐温 80 溶液(4.3)彻底清洗不锈钢开口直壁容器 3 次,洗液并入开口直壁量筒(5.7)。在 15 ℃~25 ℃室温下再次静置过夜沉淀 12 h~24 h,用虹吸管(5.8)吸取并弃去上清液,避免扰动,保留 90 ml~100 ml 含沉淀物的样品。

    注 1:若样品中蛔虫卵浓度在 10 倍检出限以上(>50 个/10 L),采样时,可只采总量不小于 1 L 的样品, 取 1 L 水样直接进行第二步的量筒沉淀浓缩。当样品中含有草梗、纸渣等较大杂质,同样应先将样品用筛网(5.5)过滤,并用吐温 80 溶液(4.3)清洗筛网及杂质,洗液并入 1 L 样品中沉淀。

7.3 离心

    沉淀浓缩后的样品(7.2)小心转移至 3 个螺口尖底离心管(5.10),分别用 15 ml 吐温80 溶液(4.3)彻底清洗开口直壁量筒 3 次,洗液均匀并入 3 个螺口尖底离心管。以 1000 g 的离心力(离心机转速计算见附录 A)离心 15 min,用巴氏滴管(5.11)小心吸取并弃去上清液, 少量留之,避免带出沉淀。

    用少量吐温 80 溶液(4.3)将 3 个离心管中的沉淀进行悬浮,将沉淀量少的 2 个离心管中的悬浮液并入沉淀量最多的一个离心管中;分别用 3 ml~5 ml 吐温 80 溶液彻底清洗被转移悬浮液的 2 个离心管,每支清洗 3 次,确保没有沉淀被丢弃,洗液并入沉淀量最多的离心管。

    以 1000 g 的离心力离心 15 min,用巴氏滴管(5.11)小心吸取并弃去上清液,少量留之,避免带出沉淀。

7.4 脂类杂质分离去除

    用与离心后沉淀(7.3)等体积的乙酸-乙酸钠缓冲液(4.2)对沉淀进行悬浮(即:离心后沉淀体积为 2 ml,加入 2 ml 缓冲液)。如果离心后沉淀体积不足 2 ml,加入缓冲液至 4 ml。以确保用乙酸乙酯(4.1)浸提后,沉淀上方有足够体积的缓冲液,便于脂类杂质层完全倾出, 且避免蛔虫卵沉淀层的丢失。

    加入 2 倍离心后沉淀(7.3)体积的乙酸乙酯(4.1),用涡旋混匀器(5.4)完全混合。以1000 g 的离心力离心 15 min,样品被分为清晰的三层。所有的非脂肪物质、重碎片,包括蛔虫卵、幼虫和原生动物在底层;中间层是缓冲液层;脂肪和其他脂溶性物质在上方形成黑而厚的一层。

    将上层和中间层液体平稳倾出弃去,记录底层沉淀体积。如有必要,可用细针在离心管壁四周对上层的脂肪层进行松动。

7.5 镜检

    加入 5 倍底层沉淀(7.4)体积的饱和硝酸钠溶液(4.4),对分离去除脂类杂质后的含卵底层沉淀进行悬浮。该悬浮液可置于 0 ℃~4 ℃冰箱(5.2)冷藏保存,备检,于 1 周内检测完毕,检测时需将其静置至室温。充分摇匀悬浮液,将其转入定量计数框(5.13),静置 5 min, 在显微镜下计数,直至全部悬浮液镜检完成。分别用 1 ml 饱和硝酸钠溶液(4.4)充分洗涤镜检完的离心管 3 次,将洗液转入定量计数框(5.13),按以上步骤镜检。所有检测到的蛔虫卵全部计数。

    镜检时,需保持环境条件的稳定,无震动和风扰,缓移计数框,自上而下“U”型逐列计数。蛔虫卵鉴定方法见附录 B。

7.6 空白对照试验

    取 10 L 同批次实验用水,按以上采样及分析步骤进行全程序空白样品的测定。

8 结果计算与表示

8.1 结果计算

    统计全部计数的蛔虫卵数,按公式(1)计算并报告 10 L 水样中蛔虫卵数:

C  =  N /  Q

    式中:

    C——水样中蛔虫卵浓度(个/10 L)

    N——检测到的所有蛔虫卵数(个)

    Q——实际水样体积(10 L)

8.2 结果表示

    水质中蛔虫卵的测定,实验最终结果取整表示,以“个 /10 L”为单位。

9 精密度

    6 家实验室分别对实际样品和低浓度(20 个/10 L)、中浓度(40 个/10 L)、高浓度(80 个/ 10 L)自配样品的蛔虫卵进行测定,实验室内相对标准偏差范围分别为:6.5%~18.9%, 10.1%~22.0%,12.8%~23.8%,8.9%~17.4%;实验室间相对标准偏差分别为 5.8%、5. 5%、4.9%、4.8%;重复性限(个/10 L)为 244、3、7、11;再现性限(个/10 L)为 260、3、7、11。

10 质量保证和质量控制

    每批次样品至少做 1 个全程序空白试验,并取 10 %的样品进行平行样测定。全程序空白试验不得检出蛔虫卵,平行样间的相对偏差不得超过 30 %。

11 废物处理

    实验中虹吸液煮沸 10 min 后可按普通废弃物处理,含乙酸乙酯的废弃液应集中保管,委托有资质的单位进行处理。

12 注意事项

    实验用过的器具均需进行高温灭活,置于水中煮沸 10 min 后方可再次使用。

    实验操作人员要注意自身防护,试验时要穿戴工作服、乳胶手套及口罩等,同时还要避免含蛔虫卵的样品污染实验室环境。

 

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