HJ 775-2015 水质 蛔虫卵的测定 沉淀集卵法

发布时间：2021-10-28 16:57:46 丨 浏览次数：

6 样品

    按 HJ/T 91 中对一般污染物采样的要求，用 10 L 以上容积的塑料桶采样。采样前需用样品荡洗塑料桶，采集样品量应≥10 L，常温下运回实验室，立即进行过滤（7.1）和沉淀（7.2）。

7 分析步骤

7.1 过滤

    充分摇匀样品，转入不锈钢开口直壁容器（5.6）至 10 L 刻度。如样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，需将样品用筛网（5.5）过滤，并用吐温 80 溶液（4.3）清洗筛网（5.5）及杂质， 洗液并入过滤后的 10 L 样品中。

7.2 沉淀

    上述样品（7.1）在 15 ℃～25 ℃室温下静置过夜沉淀 12 h～24 h，用虹吸管（5.8）小心吸取并弃去上清液，避免扰动，保留 1 L 含沉淀物的样品，转入 1000 ml 开口直壁量筒（5.7）， 分别用 50 ml 吐温 80 溶液（4.3）彻底清洗不锈钢开口直壁容器 3 次，洗液并入开口直壁量筒（5.7）。在 15 ℃～25 ℃室温下再次静置过夜沉淀 12 h～24 h，用虹吸管（5.8）吸取并弃去上清液，避免扰动，保留 90 ml～100 ml 含沉淀物的样品。

    注 1：若样品中蛔虫卵浓度在 10 倍检出限以上（>50 个/10 L），采样时，可只采总量不小于 1 L 的样品， 取 1 L 水样直接进行第二步的量筒沉淀浓缩。当样品中含有草梗、纸渣等较大杂质，同样应先将样品用筛网（5.5）过滤，并用吐温 80 溶液（4.3）清洗筛网及杂质，洗液并入 1 L 样品中沉淀。

7.3 离心

    沉淀浓缩后的样品（7.2）小心转移至 3 个螺口尖底离心管（5.10），分别用 15 ml 吐温80 溶液（4.3）彻底清洗开口直壁量筒 3 次，洗液均匀并入 3 个螺口尖底离心管。以 1000 g 的离心力（离心机转速计算见附录 A）离心 15 min，用巴氏滴管（5.11）小心吸取并弃去上清液， 少量留之，避免带出沉淀。

    用少量吐温 80 溶液（4.3）将 3 个离心管中的沉淀进行悬浮，将沉淀量少的 2 个离心管中的悬浮液并入沉淀量最多的一个离心管中；分别用 3 ml～5 ml 吐温 80 溶液彻底清洗被转移悬浮液的 2 个离心管，每支清洗 3 次，确保没有沉淀被丢弃，洗液并入沉淀量最多的离心管。

    以 1000 g 的离心力离心 15 min，用巴氏滴管（5.11）小心吸取并弃去上清液，少量留之，避免带出沉淀。

7.4 脂类杂质分离去除

    用与离心后沉淀（7.3）等体积的乙酸-乙酸钠缓冲液（4.2）对沉淀进行悬浮（即：离心后沉淀体积为 2 ml，加入 2 ml 缓冲液）。如果离心后沉淀体积不足 2 ml，加入缓冲液至 4 ml。以确保用乙酸乙酯（4.1）浸提后，沉淀上方有足够体积的缓冲液，便于脂类杂质层完全倾出， 且避免蛔虫卵沉淀层的丢失。

    加入 2 倍离心后沉淀（7.3）体积的乙酸乙酯（4.1），用涡旋混匀器（5.4）完全混合。以1000 g 的离心力离心 15 min，样品被分为清晰的三层。所有的非脂肪物质、重碎片，包括蛔虫卵、幼虫和原生动物在底层；中间层是缓冲液层；脂肪和其他脂溶性物质在上方形成黑而厚的一层。

    将上层和中间层液体平稳倾出弃去，记录底层沉淀体积。如有必要，可用细针在离心管壁四周对上层的脂肪层进行松动。

7.5 镜检

    加入 5 倍底层沉淀（7.4）体积的饱和硝酸钠溶液（4.4），对分离去除脂类杂质后的含卵底层沉淀进行悬浮。该悬浮液可置于 0 ℃～4 ℃冰箱（5.2）冷藏保存，备检，于 1 周内检测完毕，检测时需将其静置至室温。充分摇匀悬浮液，将其转入定量计数框（5.13），静置 5 min， 在显微镜下计数，直至全部悬浮液镜检完成。分别用 1 ml 饱和硝酸钠溶液（4.4）充分洗涤镜检完的离心管 3 次，将洗液转入定量计数框（5.13），按以上步骤镜检。所有检测到的蛔虫卵全部计数。

    镜检时，需保持环境条件的稳定，无震动和风扰，缓移计数框，自上而下“U”型逐列计数。蛔虫卵鉴定方法见附录 B。

7.6 空白对照试验

    取 10 L 同批次实验用水，按以上采样及分析步骤进行全程序空白样品的测定。

8 结果计算与表示

8.1 结果计算

    统计全部计数的蛔虫卵数，按公式（1）计算并报告 10 L 水样中蛔虫卵数：

C  =  N /  Q

    式中：

    C——水样中蛔虫卵浓度（个/10 L）

    N——检测到的所有蛔虫卵数（个）

    Q——实际水样体积（10 L）

8.2 结果表示

    水质中蛔虫卵的测定，实验最终结果取整表示，以“个 /10 L”为单位。

9 精密度

    6 家实验室分别对实际样品和低浓度（20 个/10 L）、中浓度（40 个/10 L）、高浓度（80 个/ 10 L）自配样品的蛔虫卵进行测定，实验室内相对标准偏差范围分别为：6.5%～18.9%， 10.1%～22.0%，12.8%～23.8%，8.9%～17.4%；实验室间相对标准偏差分别为 5.8%、5. 5%、4.9%、4.8%；重复性限（个/10 L）为 244、3、7、11；再现性限（个/10 L）为 260、3、7、11。

10 质量保证和质量控制

    每批次样品至少做 1 个全程序空白试验，并取 10 %的样品进行平行样测定。全程序空白试验不得检出蛔虫卵，平行样间的相对偏差不得超过 30 %。

11 废物处理

    实验中虹吸液煮沸 10 min 后可按普通废弃物处理，含乙酸乙酯的废弃液应集中保管，委托有资质的单位进行处理。

12 注意事项

    实验用过的器具均需进行高温灭活，置于水中煮沸 10 min 后方可再次使用。

    实验操作人员要注意自身防护，试验时要穿戴工作服、乳胶手套及口罩等，同时还要避免含蛔虫卵的样品污染实验室环境。

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