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HJ/T 347-2007 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试行)

发布时间:2021-10-23 15:40:38 丨 浏览次数:

    粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。在 44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法,造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法。

第一篇 多管发酵法

1 适用范围

    本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。

2 原理

    多管发酵法是以最可能数(most probable number)简称 MPN 来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论,估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑,并且进行大量的重复检定,可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加, 这种差异便会减少,对于细菌含量的估计值,大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上,水样检验所要求重复的数目,要根据所要求数据的准确度而定。

3 培养基和试剂

    本标准所用试剂除另有注明外,均为符合国家标准的分析纯化学试剂;实验用水为新制备的去离子水。

3.1 单倍乳糖蛋白胨培养液:

    成分:

    蛋白胨 10g

    牛肉浸膏 3g

    乳糖 5g

    氯化钠 5g

    1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL

    蒸馏水 1000mL

    制法:将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于 1000mL 蒸馏水中,调节 pH 为 7.2~7.4,再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL,充分混匀,分装于含有倒置的小玻璃管的试管中,于高压蒸汽灭菌器中,在 115℃灭菌 20min,贮存于暗处备用。

3.2 三倍乳糖蛋白胨培养液:按上述配方比例三倍(除蒸馏水外),配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液, 制法同上。

3.3 EC 培养液:

    成分:

    胰胨 20g

    乳糖 5g

    胆盐三号 1.5g

    磷酸氢二钾(K2HPO4) 4g

    磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.5g

    氯化钠 5g

    蒸馏水 1000mL

    制法:将上述成分加热溶解,然后分装于含有玻璃倒管的试管中。置高压蒸汽灭菌器中,115℃灭菌 20min。灭菌后 pH 应为 6.9。

3.4 培养基的存放

    在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于 30℃的暗处,存放时应避免阳光直接照射,并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化,或体积变化明显时废弃不用。

4 步骤

4.1 水样接种量

    将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。

相对未受污染的水样接种量为 10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种 1mL、0.1mL、0.01mL 或 0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表 1。

 HJ/T 347-2007 水质  粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试行)(图1)

    如接种体积为 10mL,则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液 5mL;如接种量为 1mL 或少于1mL,则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液 10mL 中。

4.2 初发酵试验

    将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在 37℃±0.5℃下培养 24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。

4.3 复发酵试验

    轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用 3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养液中。在 44.5℃±0.5℃温度下培养 24h±2h(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)。接种后所有发酵管必须在 30min 内放进水浴中。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。

5 结果的计算

    根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目,从表 2 或表 3 中查得每升水样中的粪大肠菌群。接种水样为 100mL2 份、10mL10 份、总量 300mL 时,查表 2 可得每升水样中的粪大肠菌群;接种 5 份 10mL 水样、5 份 1mL 水样、5 份 0.1mL 水样时,查表 3 求得 MPN 指数,MPN 值再乘 10,即为 1L 水样中的粪大肠菌群。

如果接种的水样不是 10mL、1mL 和 0.1mL,而是较低的或较高的三个浓度的水样量,也可查表3 求得 MPN 值,再经下式计算成每 100mL 的 MPN 值。

 HJ/T 347-2007 水质  粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试行)(图2)

HJ/T 347-2007 水质  粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法(试行)(图3)

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