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HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法

发布时间:2021-10-09 14:52:56 丨 浏览次数:

8 样品

8.1 样品采集

    点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ/T 494和HJ/T 91的相关规定执行。

    采集微生物样品时,采样瓶(7.1)不得用样品洗涤,采集样品于灭菌的采样瓶中。样 品采集量可根据水体实际情况而定,一般不少于250 ml。

    采集河流、湖库等地表水样品时,可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中,约距水 面 10~15 cm 处,瓶口朝水流方向,拔瓶塞,使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞,将采样瓶从水中取出。如果没有水流,可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。样品采集完毕后,迅速扎上无菌包装纸。

    从龙头装置采集样品时,不要选用漏水龙头,采水前将龙头打开至最大,放水 3~5 min, 然后将龙头关闭,用火焰灼烧约 3 min 灭菌或用 70%~75%的酒精对龙头进行消毒,开足龙头,再放水 1 min,以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度,小心接入瓶内。

    采集地表水、废水样品及一定深度的样品时,也可使用灭菌过的专用采样装置采样。 在同一采样点进行分层采样时,应自上而下进行,以免不同层次的搅扰。

    如果采集的是含有活性氯样品,需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液(6.6),以除去活性氯对细菌的抑制作用(每 125 ml 容积加入 0.1 ml 的硫代硫酸钠溶液);如果采集的是重金属离子含量较高的样品,则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液(6.7),以消除干扰(每 125 ml 容积加入 0.3 ml 的乙二胺四乙酸二钠溶液)。

    注:15.7 mg 硫代硫酸钠(6.4)可去除样品中 1.5 mg 活性氯,硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。

8.2 样品保存

    采样后应在 2 h 内检测,否则,应 10℃以下冷藏但不得超过 6 h。实验室接样后,不能立即开展检测的,将样品在 4℃以下冷藏并在 2 h 内检测。

9 分析步骤

9.1 样品过滤

    根据样品的种类判断接种量,最小过滤体积为10 ml,如接种量小于10 ml时应逐级稀释。

    先估计出适合在滤膜上计数所使用的体积,然后再取这个体积的1/10和10倍,分别过滤。理想的样品接种量是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20~60个,总菌落数不得超过200个。当最小过滤体积为10 ml,滤膜上菌落密度仍过大时,则应对样品进行稀释。1:10稀释的方法为:吸取10 ml样品,注入盛有90 ml无菌水(6.3)的三角烧瓶中,混匀,制成1:10稀释样品。样品接种量参考表见表1。

    用灭菌镊子以无菌操作夹取无菌滤膜(6.2)贴放在已灭菌的过滤装置(7.4)上,固定好过滤装置,将样品充分混匀后抽滤,以无菌水(6.3)冲洗器壁2~3次。样品过滤完成后, 再抽气约5 s,关上开关。

HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法(图1)

9.2 培养

    用灭菌镊子夹取滤膜移放在MFC培养基(6.1)上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培 养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将培养皿倒置,放入恒温培养箱内,44.5℃±0.5℃ 培养24 h±2 h。

9.3 对照试验

9.3.1 空白对照

    每次试验都要用无菌水(6.3)按照步骤9.1和9.2进行实验室空白测定。

9.3.2 阳性及阴性对照

    将粪大肠菌群的阳性菌株(如大肠埃希氏菌Escherichia coli)和阴性菌株(如产气肠杆菌Enterobacter aerogenes)制成浓度为40~600 CFU/L的菌悬液,分别按照9.1~9.2步骤培养, 阳性菌株应呈现阳性反应,阴性菌株应呈现阴性反应,否则,该次样品测定结果无效,应查明原因后重新测定。

10 结果计算与表示

10.1 结果判读

    MFC培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落为粪大肠菌群菌落,予以计数。

    MFC培养基上呈灰色、淡黄色或无色的菌落为非粪大肠菌群菌落,不予计数。 结果判读参考图片见图1。

 HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法(图2)

10.2 结果计算

    样品中的粪大肠菌群数(CFU/L),按照公式(1)进行计算:

 HJ 347.1-2018 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法(图3)

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