HJ 1000-2018 水质 细菌总数的测定 平皿计数法

发布时间：2021-10-09 09:51:58 丨 浏览次数：

8 样品

8.1 样品采集

    点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、HJ/T 494 和 HJ/T 91 的相关规定执行。

    采集微生物样品时，采样瓶（7.1）不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。

    采集河流、湖库等地表水样品时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，约距水 面 10～15 cm 处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。样品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。

    从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大，放水 3～5 min， 然后将龙头关闭，用火焰灼烧约 3 min 灭菌或用 70%～75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙头，再放水 1 min，以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。

    采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。 在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。

    如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.5），以除去活性氯对细菌的抑制作用（每 125 ml 容积加入 0.1 ml 硫代硫酸钠溶液）；如果采集的是重金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.6），以消除干扰（每 125 ml 容积加入 0.3 ml 乙二胺四乙酸二钠溶液）。

    注：15.7 mg 硫代硫酸钠（6.3）可去除样品中 1.5 mg 活性氯，硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。

8.2 样品保存

    采样后应在 2 h 内检测，否则，应 10℃以下冷藏但不得超过 6 h。实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品于 4℃以下冷藏并在 2 h 内检测。

9 分析步骤

9.1 样品稀释

    将样品用力振摇 20～25 次，使可能存在的细菌凝团分散。根据样品污染程度确定稀释倍数。以无菌操作方式吸取 10 ml 充分混匀的样品，注入盛有 90 ml 无菌水（6.2）的三角烧瓶中（可放适量的玻璃珠），混匀成 1:10 稀释样品。吸取 1:10 的稀释样品 10 ml 注入盛有 90 ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成 1:100 稀释样品。按同法依次稀释成 1:1000、1:10000 稀释样品。每个样品至少应稀释 3 个适宜浓度。

    注：吸取不同浓度的稀释液时，每次必须更换移液管。

9.2 接种

    以无菌操作方式用 1 ml 灭菌的移液管吸取充分混匀的样品或稀释样品 1 ml，注入灭菌平皿中，倾注 15～20 ml 冷却到 44～47℃的营养琼脂培养基（6.1），并立即旋摇平皿，使样品或稀释样品与培养基充分混匀。每个样品或稀释样品倾注 2 个平皿。

9.3 培养

    待平皿内的营养琼脂培养基冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上（避免因表面水分凝结 而影响细菌均匀生长），在 36℃±1℃条件下，恒温培养箱（7.3）内培养 48 h±2 h 后观察结果。

9.4 空白试验

    用无菌水做实验室空白测定，培养后平皿上不得有菌落生长，否则，该次样品测定结果 无效，应查明原因后重新测定。

10 结果计算与表示

10.1 结果判读

    平皿上有较大片状菌落且超过平皿的一半时，该平皿不参加计数。

    片状菌落不到平皿的一半，而其余一半菌落分布又很均匀时，将此分布均匀的菌落计数， 并乘以 2 代表全皿菌落总数。

    外观（形态或颜色）相似，距离相近却不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小 菌落的直径，予以计数。紧密接触而外观相异的菌落，予以计数。

10.2 结果计算

    以每个平皿菌落的总数或平均数（同一稀释倍数两个重复平皿的平均数）乘以稀释倍数 来计算 1 ml 样品中的细菌总数。各种不同情况的计算方法如下：

    优先选择平均菌落数在 30～300 之间的平皿进行计数，当只有一个稀释倍数的平均菌落数符合此范围时，以该平均菌落数乘以其稀释倍数为细菌总数测定值（见表 1 例 1）。

    若有两个稀释倍数平均菌落数在 30～300 之间，计算二者的比值（二者分别乘以其稀释倍数后，较大值与较小值之比）。若其比值小于  2，以两者的平均数为细菌总数测定值；若大于或等于 2，则以稀释倍数较小的菌落总数为细菌总数测定值（见表 1 例 2、例 3、例 4）。

    若所有稀释倍数的平均菌落数均大于 300，则以稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数为细菌总数测定值（见表 1 例 5）。

    若所有稀释倍数的平均菌落数均小于 30，则以稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数为细菌总数测定值（见表 1 例 6）。

    若所有稀释倍数的平均菌落数均不在 30～300 之间，则以最接近 300 或 30 的平均菌落数乘以稀释倍数为细菌总数测定值（见表 1 例 7）。

表1 稀释倍数选择及菌落总数测定值

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