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GB/T 18204.10-2000 游泳池水微生物检验方法 大肠菌群测定
6.1 在2个装有50 mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100 mL。
6.2 在10支装有5 mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加人水样10 mL。
6.3 轻摇试管，使液体充分混匀，置36℃±1℃培养箱中，培养24 h。
6.4 观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
7.1 平板分离
自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到伊红美蓝琼脂平板上，置36℃± 1℃培养箱培养18〜24 h,观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
7.2 复发酵试验
挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36℃±1℃培养箱中，培养24 h。
7.3 凡乳糖发酵管最终产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，为大肠菌群阳性。记下证实试验的阳性管数，査总大肠菌群（MPN〉检索表得出1 000 mL水样中总大肠菌群的MPN值。
8.1 滤器
8.2 滤膜：孔径0.45 μm。直径根据滤器规格，目前常用的有35 mm和47 mm两种。
8.3 抽滤设备。
8.4 无齿银子。
8.5 其他仪器见GB/T 18204.2-2000中第3章。
9.1 品红亚硫酸钠培养基
9.1.1 成分：
蛋白豚 10 g
酵母浸膏 5g
牛肉膏 5 g
乳糖 10 g
琼脂 10〜20 g
磷酸氢二钾 3.5 g
无水亚硫酸钠 5g
5%碱性品红乙醇溶液 20 mL
蒸馏水 1 000 mL
9.1.2 储备培养基的制备
将璘酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白陈加到含有900 mL蒸憎水的烧杯中，溶解后调pH值到7.2〜7.4，加入琼脂加热溶解，用蒸馏水补足至1 000 mL,趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内115℃高压灭菌20 min置冷暗处备用。
9.1.3 平皿培养基的制备
将上述培养基加热融化，根据培养基的用量，碱性品红乙醇溶液与培养基按1：50的比例，用灭菌吸管吸取一定量的碱性品红溶液置于灭菌空试管中。再按1： 200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解，在沸水浴中煮沸灭菌10 min。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色褪成淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基中，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入灭菌的空平皿内•待其冷却凝固后置冰箱内备用。此培养基于冰箱中保存不宜超过两周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。
9.2 乳糖蛋白淼培养液
见5.1。
10.1 滤膜灭菌：将滤膜放入含蒸憎水的烧杯中，煮沸灭菌三次，每次15 min。前两次煮沸后需更换水洗涤2〜3次，以除去残留溶剂。
10.2 滤器灭菌：用121℃高压灭菌20 min或用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
10.3 水样过滤：用无菌蹑子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在滤床上。固定好滤器，将100 mL水样（如水样含菌数较多，可减少滤水样量或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-0. 5×105 Pa（-0.5大气压）下抽滤。
10.4 培养：水样滤完后，再抽气约5s关上滤器阀门，取下滤器。用灭菌银子夹取滤膜边缘部分，移放在乳糖琼脂分离培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者之间不得留有气泡。然后将平皿倒置，放人36℃±1℃恒温箱内培养18〜24 h。
10.5 挑取滤膜上符合下列特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。
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