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GB/T 18204.10-2000 游泳池水微生物检验方法 大肠菌群测定

发布时间:2021-09-24 16:53:38 丨 浏览次数:

6 推测性试验

6.1 在2个装有50 mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100 mL。

6.2 在10支装有5 mL三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加人水样10 mL。

6.3 轻摇试管,使液体充分混匀,置36℃±1℃培养箱中,培养24 h。

6.4 观察每管是否产气,如不产气则报告为大肠菌群阴性;若有气体产生则为推测性试验阳性,需做进一步的证实试验。

7 证实试验

7.1 平板分离

    自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到伊红美蓝琼脂平板上,置36℃± 1℃培养箱培养18〜24 h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。

7.2 复发酵试验

    挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36℃±1℃培养箱中,培养24 h。

7.3 凡乳糖发酵管最终产酸、产气,革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,为大肠菌群阳性。记下证实试验的阳性管数,査总大肠菌群(MPN〉检索表得出1 000 mL水样中总大肠菌群的MPN值。

GB/T 18204.10-2000 游泳池水微生物检验方法 大肠菌群测定(图1)

8 仪器

8.1 滤器

8.2 滤膜:孔径0.45 μm。直径根据滤器规格,目前常用的有35 mm和47 mm两种。

8.3 抽滤设备。

8.4 无齿银子。

8.5 其他仪器见GB/T 18204.2-2000中第3章。

9 培养基

9.1 品红亚硫酸钠培养基

9.1.1 成分:

        蛋白豚          10 g

        酵母浸膏       5g

        牛肉膏          5 g

        乳糖             10 g

        琼脂             10〜20 g

        磷酸氢二钾    3.5 g

        无水亚硫酸钠 5g

        5%碱性品红乙醇溶液 20 mL

        蒸馏水           1 000 mL

9.1.2 储备培养基的制备

    将璘酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白陈加到含有900 mL蒸憎水的烧杯中,溶解后调pH值到7.2〜7.4,加入琼脂加热溶解,用蒸馏水补足至1 000 mL,趁热用脱脂棉或绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内115℃高压灭菌20 min置冷暗处备用。

9.1.3 平皿培养基的制备

    将上述培养基加热融化,根据培养基的用量,碱性品红乙醇溶液与培养基按1:50的比例,用灭菌吸管吸取一定量的碱性品红溶液置于灭菌空试管中。再按1: 200的比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内,加灭菌水少许使其溶解,在沸水浴中煮沸灭菌10 min。

    用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液,滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色褪成淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基中,并充分混匀(防止产生气泡),立即将此种培养基适量倾入灭菌的空平皿内•待其冷却凝固后置冰箱内备用。此培养基于冰箱中保存不宜超过两周,如培养基已由淡红色变成深红色,则不能再用。

9.2 乳糖蛋白淼培养液

    见5.1。

10 操作步骤

10.1 滤膜灭菌:将滤膜放入含蒸憎水的烧杯中,煮沸灭菌三次,每次15 min。前两次煮沸后需更换水洗涤2〜3次,以除去残留溶剂。

10.2 滤器灭菌:用121℃高压灭菌20 min或用点燃的酒精棉球火焰灭菌。

10.3 水样过滤:用无菌蹑子夹取灭菌滤膜边缘部分,将粗糙面向上,贴放在滤床上。固定好滤器,将100 mL水样(如水样含菌数较多,可减少滤水样量或将水样稀释)注入滤器中,打开滤器阀门,在-0. 5×105 Pa(-0.5大气压)下抽滤。

10.4 培养:水样滤完后,再抽气约5s关上滤器阀门,取下滤器。用灭菌银子夹取滤膜边缘部分,移放在乳糖琼脂分离培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者之间不得留有气泡。然后将平皿倒置,放人36℃±1℃恒温箱内培养18〜24 h。

10.5 挑取滤膜上符合下列特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。

 

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